ExactBlot™非轻重链特异性二抗

2023-11-24
正能生物·市场部
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ExactBlot™ Secondary Antibody for IP

''',安然无忧!

 

IP(免疫沉淀)实验是一种常用的生物化学实验技术,用于检测和分离特定的蛋白质。它基于抗体的高度特异性,可以用来富集某个特定的蛋白质,并去除其他非特异性的蛋白质。
免疫沉淀的简要步骤为:1)将抗体与固相支持物相互作用。2)抗体与待测样品中的目标蛋白质结合,形成抗原-抗体复合物。3)通过洗涤步骤去除非特异性的蛋白质。4)将特异性蛋白质从固相支持物上解离下来,完成富集。5)通过多种方法对富集后的蛋白质进行分析。
免疫沉淀实验是研究蛋白质相互作用、信号传导以及调控蛋白功能的重要工具之一,广泛应用于生物医学研究中。

ExactBlot™非轻重链特异性二抗

IP实验原理


IP中的轻重链干扰

当进行IP实验时,IP抗体在洗脱后加入loading buffer的变性过程中被破坏了结构,断裂为组成抗体的轻重链。此时若IP抗体种属与WB抗体种属来源相同,变性后的抗体就会被常规Anti-IgG(H+L)二抗识别,显影时就出现了IP抗体变性后产生的轻重链。其中轻链大小为25kDa左右,重链大小为55kDa左右,当目标蛋白分子大小在轻重链附近时,这类信号可能会影响我们对实验结果的判断。

避免轻重链杂信号的常见方法有:
1)捕获抗体、检测抗体采用不同来源物种,使用针对检测抗体物种的特异性二抗;
2)捕获抗体采用没有恒定区的纳米抗体。
但是受限于实验经费和各种外部因素,这两种方法有时并不是这么容易实现。


正能ExactBlot™ IP专用二抗

为了帮助客户避免在免疫沉淀实验中出现的轻重链干扰问题,正能生物开发了专用于IP实验的优化二抗,优化后的二抗具有空间特异性,能够识别空间构象表位,只与非变性的WB检测一抗相互结合,而不与变性后失去原本空间表位的捕获一抗结合,因此既不识别抗体重链也不识别轻链,轻松避免了实验干扰。


ExactBlot™非轻重链特异性二抗ExactBlot™非轻重链特异性二抗

图左:使用常规Anti-IgG(H+L),检测时变性后的抗体轻重链均被识别。

图右:使用正能- ExactBlot™ IP专用二抗,有效避免轻重链干扰,目的蛋白信号更加清晰。

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Cat No. 550124

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