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  • 正能生物的产品货期

        正能生物“精品一抗”及“重组兔单抗”系列产品线,目前基本完成全现货覆盖;内参、二抗和标签抗体系列中,热卖靶标及货号现货充足!

        根据市场需求反馈情况,我们会不间断的调整抗体生产量及库存储备。现已基本完成热门靶标的全部现货储备。

        新官网目前已经能够在产品最终界面查看所需产品的详细货期(如图),欢迎广大用户选购~

    正能生物的产品货期

  • 如何储存抗体?

    具体储存建议以产品说明书及产品标签为准。

    1.一般情况下,浓缩抗体可以在2-8°C条件下储存12周

    2.为延长抗体使用期限,建议客户收到抗体后立即冻存于-20°C冰箱(50%甘油的凝固点为-24°C)

    3.长期储存,建议将抗体分装保存在温度设置更低的冰箱中(分裝目的是为了减少反复冻融对抗体活性的损害,同时避免多次从同-管中吸取抗体造成污染)。


  • 特殊样本如何处理?

          脑组织属于多脂质特殊组织,建议用液氮研磨组织,用强力的蛋白提取液提取蛋白,防止蛋白降解(全程冰上操作,蛋白提取液要预先预冷。不要4℃放置太长时间)。在4℃旋转混合仪上进行充分裂解30min,裂解液要充分离心4℃,15000rpm,30min。小心的避开脂质层,取上清再加足量或者过量的Laemmli buffer,95℃,20min加热变性,如果看不见明显的脂质层,可以将离心时间延长至60min。

          核蛋白和膜蛋白,这类蛋白的内源性表达量大部分较低,需通过专门的提取方式进行富集,然后裂解得到待测样本,这种类型蛋白的提取Kit商业应用已经很成熟,国内可供选择的品牌也很多。


  • 为什么在正能官网输入某些购买过的抗体【货号】搜索不到对应产品了?

          正能生物会不间断的进行产品应用验证和产品线梳理,下架原因一般有如下情况:

    (1)对于某一应用检测不合格的产品,我们将下架该产品的该应用;

    (2)对于多个应用的多轮检测仍不合格的产品,我们将直接下架该货号;

    (3)通过多轮验证后的产品,出现了反应种属、应用和功能的重复,例如A货号与B货号产品的反应种属和应用完全相同、宿主相同、性能相同,则我们将会择其一进行下架,减少客户选择产品的难度;

    (4)某一货号产品销量极少,即将过保时。


  • 如何跑出好看的LC3双条带?

        根据经验,想要跑出好看的LC3双条带,最适用的条件是12%的分离胶,以及15孔的梳子进行上样和电泳。

        依据试验,10孔的梳子很难分开LC3的双条带,15%的分离胶浓度可能过高,造成电泳时间变长,有条带弥散的风险。转膜使用正常的0.22μm PVDF,80v,60min即可,转膜液添加20%甲醇,保证小分子蛋白与膜的结合。


  • 如何选择合适的二抗?

        二抗,又名“secondary antibody”,常出现在需要使用一抗的免疫实验中。

        按照功能可分为常规标记二抗和荧光二抗两种。二抗的结合对象为一抗,其以一抗本身 (如兔IgG)为靶标,通常在产品名称中用类似“Goat Anti-Rabbit(即山羊抗兔)”来标识靶标识别关系。以“Goat Anti-Rabbit(即山羊抗兔)”为例,“Goat-山羊”为二抗的抗体来源种属(即“宿主”),“Rabbit-兔”为二抗所要结合的一抗的抗体来源种属。

        当某一免疫反应体系中的一抗来源为“Mouse-小鼠”时,即可选用“Goat Anti-Mouse”或“Rabbit Anti-Mouse”等二抗来完成反应。

        二抗与一抗的抗体来源种属,应保持不同,以避免抗体内自相反应。

        


  • 曝光显出多个条带,是杂带吗?蛋白大小跟报道的分子量不一致,是不是非特异带?

    “出现杂带”以及“条带位置不符合预期”,这两种情况需要分开讨论:

    第一种情况:蛋白转录及翻译后的修饰,该因素是引起杂带的最常见原因。

    转录后,由于选择性剪切的作用,同一个转录本会翻译出不同大小的蛋白,这类蛋白称为该蛋白的剪接体。

    在UniProt查询蛋白时,可以在“Sequences”部分看到该蛋白已报道过的Isoforms。在进行实验前,需要比对每个剪接体造成的变化是否影响了目标蛋白的对应结构域,进而判断本研究种涉及的蛋白到底应该检测哪条主带,又或者哪几条带。

    我们在阅读文献时所看到的WB实验图片中,也偶尔会出现双条带或多条带。这些现象是研究过程中值得解释和讨论的。在进行Western Blot实验时,我们应该清楚,针对某些目标蛋白的检测结果并不一定是只有一条带。

    此外,蛋白在翻译完成后,可能会进行各类修饰,引起蛋白大小明显改变的多为糖基化修饰。在一些分泌型蛋白和膜蛋白上,糖基化位点的存在会将一个蛋白的大小增加至两倍或者更多,且由于组织的特异性,同一个蛋白在不同样本中的糖基化修饰差别很大(如下图所示)。

    同时,有的蛋白存在前体和成熟体,这种蛋白一般客户在研究时,应该会有所了解,但为了防止信息差,依然需要跟客户解释这个蛋白本身的特性。

    曝光显出多个条带,是杂带吗;蛋白大小跟报道的分子量不一致,是不是非特异带? 

     另一种情况比较偶发:在细胞的培养状态不太好或细胞传代过多的情况下,由于基因组的变异,细胞会表达某种蛋白的截短蛋白。这种被截短、剪接后的靶蛋白可能是未经报道,但由于仍存在抗原识别位点(或抗原表位)而被识别出来。一般情况下,可以通过裁膜避免。

     还有一各影响因素,即蛋白等电点。

     蛋白质本身是有电荷的,当处于某一个pH值时,蛋白质电荷会被中和,那么该处的数值我们称为等电点pI。大部分的蛋白质的等电点小于6,所以我们在中性的电泳环境中,蛋白因为等电点小于pH值,因此带负电荷,而电泳是蛋白从负极向正极迁移的过程,带负电的蛋白在电场中,不会受到阻力。但是有的蛋白等电点比较大,大于7甚至接近8,这时,由于电泳条件不足以中和电荷,使得蛋白质带正电,在电场中迁移受到阻力,由此产生蛋白分子量变大的错觉,因此marker仅能作为参考,而实际的主带仍然要结合蛋白特性进行判断。

     样本保存和冻融。反复的冻融,或者蛋白酶抑制剂,磷酸酶抑制剂失效,会造成蛋白质的降解,引起多条带的情况出现,但这种情况一般是以“拖尾”的形式居多。另一种情况,大分子的蛋白本身会发生降解,但是由于观测的条带在比较大的marker附近,降解的较小片段在实际裁膜过程中,基本检测不到。同时,煮沸蛋白的时间不够,冻融后没有煮,会造成蛋白形成同源多聚体的形式,在目的大小两倍,或者多倍的地方出现条带。



  • 条带跑出来弥散,不成带型?

        考虑分离胶和浓缩胶的配方是否出现了问题。Tris-HCl这一类的缓冲液,APS促凝剂等等,随着配制时间,保存时间的推移,可能会产生pH值失衡,药物药性失效,导致制备凝胶时出现问题。例如,APS失效会引起凝胶凝固时间变长,正常条件下20分钟以内可以凝固,可能会延长到30到40分钟,这种情况会影响条带分离的成型。

        客户使用380145 - Aurora B Rabbit pAb,得到如下条带:

    条带跑出来弥散,不成带型?条带跑出来弥散,不成带型?

        经过沟通,更换APS之后,得到优化的结果:

    条带跑出来弥散,不成带型?

        不同的缓冲体系试用pH的范围,一般是依据蛋白等电点等因素进行适当的选择。

    条带跑出来弥散,不成带型?


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