公司简介

      实验结果的可重复性差是科学研究中一个普遍存在的问题(Goodman 2018)。2016年发表于《Nature》杂志上的一项调查报告显示,超过70%的研究人员无法重复其他科学家的实验结果,甚至许多研究人员在重复自己的实验数据时同样遇到困难。不可重复的实验数据阻碍科学进步,也会耽误个人的学术研究进展(Baker 2016)。

      在一些免疫学或细胞生物学实验中如蛋白质的相互作用、细胞类型的鉴定等,很多实验数据的不可重复性通常归因于所用的抗体缺乏验证,因而无法到达实验预期。比如抗体的交叉反应性、批间差异性以及使用不当等问题都可能会导致不同的实验结果(Baker 2015)。此外,选用不良表征的抗体可能导致论文拒稿,或使后续实验建立在错误的实验结果上,进而误导整个研究项目。因此,为了确保研究的可重复性,对所用抗体进行验证是非常必要的。



抗体验证原则和方法


    “抗体验证即特定抗体适用于某预期应用的实验证据及数据报告” (Weller 2018)。表征良好的抗体具有较好的一致并能生成可靠的实验数据,对于解决“实验可重现性危机”至关重要。鉴于这一现象,学术界积极采取了许多措施以提高抗体验证品质,包括成立抗体验证国际工作组(IWGAV)和发布抗体验证5大标准建议(Uhlen等人,2016年),即基因策略、正交策略、独立抗体策略、标签蛋白表达和免疫捕获及质谱分析。

      为确保正能抗体在您的实验中有效工作,正能(Zen-Bioscience) 通过5大验证标准及引入靶基因敲除(KO)验证策略的方法,不断确定定检测中抗体的功能性、特异性和灵敏性。超过15年的抗体生产经验以及对科学研究的敬畏与热爱,让我们为确保抗体的质量,针对每种抗体都定制了恰当的验证策略组合,包括:

  1. 靶基因敲除(KO)验证策略

  2. 独立抗体验证策略

  3. 激动剂/抑制剂验证策略

  4. 多种细胞系验证策略

  5. 不同批次多种抗体比较验证策略

  6. 标签蛋白表达策略

  7. 修饰验证策略

  8. 重组策略


01
靶基因敲除验证策略

测量对照细胞或组织中的相关信号,利用 CRISPR/Cas9 或 RNAi 等技术在对照细胞或组织中对靶基因进行敲除(KO)或敲降(KD)。

验证策略

验证策略

验证策略

#240016

[KO] beta III Tubulin Mouse mAb

Western blot analysis of beta III Tubulin in HeLa(WT) and TUBB3-Knockout Hela(KO) using beta III Tubulin antibody.

验证策略

#240069

[KO] Insulin Degrading Enzyme Mouse mAb

Western blot analysis of Insulin Degrading Enzyme in Hela(WT) and IDE-Knockout Hela(KO) using Insulin Degrading Enzyme antibody.

验证策略

#240158

[KO] SELENBP1 Mouse mAb

Western blot analysis of SELENBP1 in HeLa(WT) and SELENBP1-Knockout HeLa(KO) using SELENBP1 antibody.

验证策略

#240105

[KO] PKA RII alpha Mouse mAb

Western blot analysis of PKA RII alpha in HeLa(WT) and PRKAR2A-Knockout HeLa(KO) using PKA RII alpha antibody.

验证策略

#240163

[KO] GRHPR Mouse mAb

Western blot analysis of GRHPR in 293T(WT) and GRHPR-Knockout 293T(KO) using GRHPR antibody.


02
独立验证策略

验证策略

验证策略

#200194

Fatty Acid Synthase (2F9) Mouse mAb

Western blot detection of Fatty Acid Synthase in  Hela,  CHO-K1 using Fatty.


03
激动剂/抑制剂验证策略

验证策略

验证策略








验证策略

#301245

Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) Rabbit pAb

#201246-4F3

p44/42 MAPK (Erk1/2) Mouse mAb

Western blot analysis of Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204)from EGF-treated A549 cells and Hydroxyurea-treated NIH/3T3 cells, using Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) Rabbit pAb (1:1000 diluted, upper) and p44/42 MAPK (Erk1/2) Mouse mAb (1:1000 diluted, lower)


04

多种细胞系验证策略

用抗体分析大量已知靶标蛋白表达水平的细胞系,确认抗体对靶标蛋白的特异性。

验证策略

正能生物验证

#220002

MLH1(4C1-D9-C7)Mouse mAb

验证策略


05

不同批次多种抗体比较验证策略

左图 : 膜孵育 #201158 Vimentin (4F8) Mouse mAb 进行两个批次间的比较, 曝光时间 30 s,

右图 : 再孵育 #201283 E Cadherin (6B10) Mouse mAb EE1013 1:1000 和 #700068 beta Actin (8F10) (HRP-Conjugate) Mouse mAb. 曝光时间 2 mins。E-Cadherin 与 Vimentin 蛋白在 MCF7 表达呈负相关。

验证策略


06

标签蛋白表达策略

为目的基因添加标签,利用抗体检测方法对来自标签蛋白的信号进行校正。

验证策略

验证策略

#200805

HDAC6 (3B2) Mouse mAb

Western blot detection of HDAC6 in T47D, Jurkat CHO-K1(B) and CHO-K1 transfected by  HDAC6-fragment EGFP fusion protein(A)cell lysates using HDAC6 mouse mAb(1:1000 diluted).


07

修饰验证策略

用抗体分析磷酸化处理后的样本,验证抗体的磷酸化特异性。

验证策略

#310021

Phospho-AKT (Ser473) Rabbit pAb


08

重组策略

对未知或蛋白质表达丰度较低的抗原靶标,可能需要在替代细胞系中使用重组蛋白或异源表达的方式来进行抗体验证。尽管我们更倾向于选择更能代表体内环境的内源蛋白,但重组蛋白具有更多优势。重组策略可用于验证抗体与蛋白同种型或其保守家族成员的交叉反应性,从而提供基于抗原同源性的抗体脱靶/结合潜力的相关信息。重组策略也可用于滴定靶蛋白,进而测试抗体的灵敏性。




以高品质打造世界级中国抗体品牌

正能生物(Zen-Bioscience的抗体已经过严格验证,您可根据官网展示的产品应用信息选择合适的抗体。性能和表征良好的抗体,可以大大缩短非必要的实验研究时间,减少解决实验技术问题的麻烦。任何与抗体相关的产品或实验技术问题,均可随时拨打我们的技术支持热线(4008 863 973转2),正能全体成员将随时为您服务!

参考文献
  1. Baker M (2016). Many researchers fail to validate antibodies for their experiments.Nature. Accessed December 20, 2021.

  2. Baker M (2015). Reproducibility crisis: Blame it on the antibodies.Nature.521, 274–276.

  3. Goodman S L (2018). The antibody horror show: an introductory guide for the perplexed.New Biotechnology.45, 9–13.

  4. Uhlen M et al. (2016). A proposal for validation of antibodies.Nature Methods.13, 823–827.

  5. Weller MG (2018). Ten basic rules of antibody validation.Anal Chem Insights.13, 1177390118757462.

  6. Fredrik Edfors, et al. (2018). Enhanced validation of antibodies for research applications. NATURE COMMUNICATIONS. 9:4130








发展历程
2007年

正能生物成立,成为国际知名抗体品牌提供OEM生产。

2011年

持续加大研发投入,创立自主品牌ZENBIO。


2014年

建立IVD原料抗体产品线,创立汇瑞新元品牌

2020年

品牌运营团队建成,开始建设全国营销网络。

2022年

开始拓展国际市场....

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